Anales de la RANM

62 A N A L E S R A N M R E V I S T A F U N D A D A E N 1 8 7 9 FENOTIPO DE LA Β-TALASEMIA INTERMEDIA Paloma Ropero, et al. An RANM. 2021;138(01): 60 - 71 El objetivo de este trabajo es comprobar, con datos hematimétricos y de manera empírica, si se puede establecer el diagnóstico y grado clínico de la β-TI cuando coexisten una triplicación de genes alfa (ααα anti 3.7 ) y una β-talasemia heterocigota, ya que la triplicación de genes alfa globina es considerado un factor importante en la severidad de la β-talasemia, exacerbando la expresión fenotípica de la misma, al causar un mayor desequilibrio entre las cadenas de globina. Para ello presentamos nuestra experiencia de casos de β-talasemia asociada a una triplicación de genes alfa (ααα anti 3.7 ) en España, en los últimos 10 años en el Hospital Clínico San Carlos de Madrid. Este trabajo es un estudio retrospectivo llevado a cabo desde enero de 2010 a diciembre de 2019 y en el que participaron 73 pacientes de origen caucásico, que mostraron simultáneamente triplicación o cuadrupli- cación de genes α y β-talasemia heterocigota. Los parámetros hematológicos y el recuento de reticulocitos fueron determinados con un contador automático de células (Coulter LH750 Analyzer; Beckman Coulter, Brea, CA, USA), incluyendo el análisis morfológico celular. Los niveles de Hb A2 y Hb F fueron medidos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) (VARIANT TM ; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Las hemoglobinas fueron analizadas por electroforesis capilar zonal siguiendo las instruc- ciones del fabricante para el sistema Sebia Capillarys Flex (Sebia, Norcross, GA), y mediante HPLC de intercambio iónico siguiendo las pautas del fabricante para el programa corto de β-talasemia de BioRad Variant II (Bio-Rad, Hercules, CA). Tras el aislamiento del ADN genómico con un método automático (Biorobot  EZ1; Quiagen GmbH, Hilden, Germany), el ADN genómico fue cuantificado con un NanoDrop 1000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE, EE. UU). El cribado de las mutaciones más frecuentes de α-talasemia así como la triplicación génica (ααα anti 3.7 ) se llevó a cabo mediante PCR multiplex seguida de hibridación inversa con un kit comercial Alpha-Globin StripAssay (ViennaLab Diagnostic GmbH, Vienna, Austria) y se confirmó mediante Multiplex Ligation- dependent Probe Amplification (MLPA), este análisis se llevó a cabo utilizando el kit MLPA (SALSA MLPA KIT P140 HBA; MRC Holland, Amsterdam, The Netherlands). El diagnóstico molecular de β-talasemia se realizó mediante secuenciación automática según el método de Sanger previamente descrito (10). En el estudio descriptivo de los datos las variables cualitativas se presentan con su distribución de frecuencias. Las variables cuantitativas se resumen con su media y desviación estándar (DE). Las variables cuantitativas que muestran una distribu- ción asimétrica se resumen con la mediana y el rango intercuartílico (RIQ). En la comparación de los parámetros entre los grupos de estudio se evalúa la asociación mediante los test no paramétricos test de la U de Mann-Whitney o el test de Kruskall Wallis en función de si son dos grupos o más, respectiva- mente. Se usan estos test no paramétricos debido a que los grupos tienen un pequeño tamaño muestral. Para todas las pruebas se acepta un valor de signifi- cación del 5%. El procesamiento y análisis de los datos se realiza mediante el software estadístico IBM SPSS Statistics v.2º. Todos los índices hematológicos y hallazgos clínicos fueron llevados a cabo con el consentimiento informado previo de los pacientes. Y todos los experimentos fueron realizados de acuerdo con la Declaración de Helsinki. Setenta y tres pacientes, 33 hombres y 40 mujeres, con un rango de edad de entre 5 meses y 65 años, presen- taron β-talasemia heterocigota asociada a triplicación de genes alfa globina (ααα anti 3.7 ). Genéticamente, todos fueron portadores de una única alteración en el gen HBB, identificándose 11 mutaciones diferentes. Estas mutaciones del gen β son: cinco β 0 -talasemia que agrupan al 64.4 % de los pacientes; 2 β + -talasemia severa en el 21.9 % de los casos y 4 β + -talasemia leve en 10 pacientes (13.7 %), siendo la más frecuente con un 36% la mutación de transversión de una C>T en el CD 39 del 2º exón [β39(C5) Gln>Stop; HBB:c.118C>T] seguida de la sustitución de una G>A en el nucleótido 110 del primer intrón [β nt 252 G>A; HBB:c.93-21G>A] con un 20.5% (Tabla 2). Se han clasificado los genotipos en tres grupos según el número de genes α globina y la severidad de la alteración en el gen globina. El grupo I corresponde a 4 pacientes que han coheredado 6 genes α y una mutación en el gen HBB que puede ser β 0 -talasemia (2 pacientes), β + -talasemia severa (1 paciente) y β + -talasemia leve (1 paciente). Los grupos II y III los constituyen pacientes con 5 genes α globina. El grupo II, está formado por 64 pacientes con β 0 -talasemia (45 pacientes), β + -talasemia severa (15 pacientes) o β + -talasemia leve (4 pacientes) y el grupo III con 5 pacientes portadores de mutaciones que afectan a los genes β y δ globina y que fenotípicamente son considerados como β + -talasemia leve (Tabla 3). Aquellos que presentaron β-TI severa (TIS) mostraron entre otros síntomas clínicos debilidad, subictericia conjuntival, cálculos biliares, espleno- megalia y pérdida de peso con palidez. Mientras que los que fueron clasificados como β-TI leve (TIL) mostraron retraso del crecimiento enlentecido, algunos, pubertad retrasada y esplenomegalia y otros, problemas óseos. En los rasgos talasémicos (RT) la mayoría presentaron fatiga, sensación de mareo, dolor de cabeza y palidez de piel. MATERIAL Y MÉTODOS RESULTADOS