Anales de la RANM

31 A N A L E S R A N M R E V I S T A F U N D A D A E N 1 8 7 9 S U P L E M E N T O I SIMPOSIO · JÓVENES INVESTIGADORES Libro de Abstracts An RANM. 2021;138(03).supl01: 31 - 54 with wild-type NLRP3. CAPS patient blood was used to study IL-1β production and formation of ASC oligomers as readouts of NLRP3 activation. Cells were treated with LPS, Pam3CSK 4 , IL-6, S100A9, IL-1α, TNF-α, palmitate, ATP, or uric acid crystals at different concentrations and times in the absence or presence of MCC950 or with different de-ubiquitinase inhibitors. The clinical ethics committee of the Clinical University Hospital Virgen de la Arrixaca (Murcia) approved this study. Contrasting with the expression of wild-type NLRP3, the sole expression of mutant NLRP3 results in a constitutive activation of the inflam- masome with the activation of caspase-1 and gasdermin D cleavage, followed by the release of several cellular proteins as IL-18, P2X7 or LDH. IL-1β release was only observed after LPS, Pam3CSK 4 , IL-6, palmitate and S100A9 treatment, compounds that activate NF-κB and the subsequent expression of Il1b gene. MCC950 was able to block the release of IL-1β, IL-18, HMGB1, IL-1α, P2X7, cystatin B, annexin-1 but not TNF-α, confirming NLRP3 activation. Deubiquitinase inhibitors were able to reduce NLRP3 activation and IL-1β release when mutant NLRP3 was expressed, suggesting that ubiquitination of mutant NLRP3 restrict its activity. Gain-of-function NLRP3 mutations present a basal activation with respect to wild-type NLPR3, and its activation tightly depends on its expres- sion levels, but could be further increased by different endogenous host-derived signals, such as IL-6, palmitate or S100A9 proteins. Additio- nally, mutated auto-active NLRP3 is post-transla- tional regulated by ubiquitination, that impairs its auto-activation. This study shed new light into the origins of non-infectious inflammatory flares in CAPS patients. Acknowledgements: This work was supported by grants to P.P. from FEDER/Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades-Agencia Estatal de Investigación (grant SAF2017-88276-R; PID2020- 116709RB-I00), Fundación Séneca (grants 20859/ PI/18, 21081/PDC/19 and 0003/COVI/20), Instituto de Salud Carlos III (DTS21/00080), European Commission H2020-SC1-2020-Single-Stage-RTD (965196 - PlasticHeal) and European Research Council (grants ERC-2013-CoG 614578 and ERC-2019-PoC 899636). Laura Hurtado-Navarro was supported by the fellowship 21214/FPI/19 (Fundación Séneca, Región de Murcia, Spain). Cristina Molina-López was supported by the fellow- ship PRE2018-087063 (Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades-Agencia Estatal de Investigación, Spain). ACTIVACIÓN DE LOS INFLAMASOMAS PIRINA Y NLRP3 DURANTE LA SEPSIS ACTIVATION OF THE PYRIN AND NLRP3 INFLAMMASO- MES DURING SEPSIS Laura Hurtado-Navarro 1 , Laura Martínez-Alarcón 1 , Graciela Valero-Navarro 1,2 , Carlos García-Palenciano 1,3 , Pablo Pelegrín 1,4 1 Instituto Murciano de Investigaciones Biosanitarias (IMIB- Arrixaca), Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia, España 2 Servicio de Cirugía General, Hospital Universitario JM Mo- rales Meseguer, Murcia, España 3 Servicio de Anestesiología y Reanimación, Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia, España ⁴ Departamento de Bioquímica y Biología Molecular B, Fac- ultad de Medicina, Universidad de Murcia, Murcia, España La sepsis es una de las principales causas de muerte en las unidades de cuidados intensivos y se define como una respuesta inflamatoria sistémica seguida por un estado de inmunosupresión. Se conoce que el inflamasoma NLRP3 participa en dicho proceso, sin embargo, el papel de otros inflamasomas, como Pirina, no está totalmente caracterizado. Se recogieron muestras de 20 individuos con una sepsis de origen intraabdominal, 19 individuos sometidos a una cirugía abdominal que no desarro- llaron sepsis y 29 controles sanos. El Comité de Ética del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia) aprobó este estudio y sus procedimientos. El inflamasoma NLRP3 se estimuló en sangre completa con LPS+ATP y el inflamasoma Pirina con LPS+TcdB. La determi- nación de oligómeros de ASC en monocitos (CD14 + CD16 + CD15 - ) se realizó por citometría de flujo y la determinación de citoquinas por ELISA. Se evaluaron parámetros clínicos, hematológicos y bioquímicos de todos los pacientes. A las 24h del inicio del episodio séptico, los pacientes presentaban marcadores de inflamación sistémica como PCR y PCT elevados en plasma (Figura 1). La liberación de IL-1β en las muestras de sangre y la formación de oligómeros de ASC en monocitos tras la estimulación de NLRP3 resultó en una respuesta diferencial entre los pacientes sépticos, identificando entre ellos un grupo de 10 individuos con una respuesta inmunocomprome- tida del inflamasoma NLRP3 y 4 individuos con una respuesta normal del mismo (Figura 2A). Sin embargo, todos los individuos estudiados presen- taron una respuesta normal cuando se activaba el inflamasoma Pirina (Figura 2B). Los pacientes inmunocomprometidos para NLRP3 presentaron elevados distintos paráme- tros de severidad, tanto bioquímicos como clínicos, como las escalas SOFA y APACHEII, así como un peor pronóstico al necesitar más días en la unidad de cuidados intensivos, días con ventilación mecánica y elevada mortalidad (Figura 2).