Anales de la RANM

287 A N A L E S R A N M R E V I S T A F U N D A D A E N 1 8 7 9 ENFERMEDAD DE CÉLULAS FALCIFORMES Ropero P, et al. An RANM. 2022;139(03): 285 - 293 A todos se les realizó un estudio hematimétrico con recuento de reticulocitos (Coulter LH750 Analyzer; Beckman Coulter, Brea, CA, EE. UU.) y morfología de los glóbulos rojos. Los niveles de HbA 2 y HbF fueron medidos por cromatografía líquida de intercambio iónico de alta resolución (HPLC-CE) (VARIANT TM ; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU). Las hemoglobinas fueron estudiadas por electroforesis capilar de zona (EC) [Sebia Capillarys Flext (Sebia, Norcross, GA)] y HPLC-CE utilizando el programa corto para la β-talasemia de BioRad (Bio-Rad, Hercules, CA) según instrucciones del fabricante. Tras el aislamiento de ADN genómico (Biorobot  EZ1; Quiagen GmbH, Hilden, Alemania), el ADN fue cuantificado en un fluorímetro Invitrogen Qubit 4 (Thermo Scientific, Wilmington, DE, EE. UU). Se descartó la asociación con α talasemia mediante cribado de las mutaciones puntuales y deleciones de α-talasemia más comunes en el mundo (21 en total) mediante PCR multiplex seguida de hibridación inversa con el kit comercial Alpha-Globin StripAssay (ViennaLab Diagnostic GmbH, Viena, Austria) cuya sensibilidad clínica es > 90%. La caracterización molecular de la HbS se realizó con el kit comercial β-Globin StripAssay MED (ViennaLab Diagnostic GmbH, Vienna, Austria) y su confirmación mediante secuenciación automática de Sanger del gen β-globina siguiendo el protocolo previamente descrito (11). Los haplotipos del clúster β se obtuvieron mediante amplificación y digestión con enzimas de restricción (PCR-RFLP) según el protocolo descrito por Rahimi et al. (12). El genotipado de los SNPs localizados en el gen Gγ (rs7482144); en el gen BCL11A (rs4671393) y en la región intergénica HBS1L-MYB (rs9376092) se llevó a cabo por secuenciación automática de Sanger utilizando los primers que aparecen recogidos en la Tabla 1. En el estudio descriptivo de los datos las variables cualitativas se presentan con su distribución de frecuencias. Las variables cuantitativas se resumen con su media y desviación estándar (DE). Las variables cuantitativas que muestran una distri- bución asimétrica se resumen con la mediana y el rango intercuartílico (RIQ). En la comparación de los parámetros entre los grupos de estudio se evalúa la asociación mediante el test no paramétrico de Fisher debido a que los grupos tienen un pequeño tamaño muestral. Para todas las pruebas se acepta un valor de significación del 5%. El procesamiento y análisis de los datos se realiza mediante el software estadístico IBM SPSS Statistics v.2º. Todos los índices hematológicos y hallazgos clínicos fueron llevados a cabo con el consentimiento informado previo de los pacientes y el estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Clínico San Carlos, Madrid, España. Todos los experimentos fueron realizados de acuerdo con la Declaración de Helsinki. RESULTADOS El valor medio de los datos hematológicos queda recogido en la tabla 2. Respecto a los valores de obtenidos del estudio de las hemoglobinas fueron: HbA2 [2,62 ± 0,52%], HbF [14,95 ± 9,13%] y HbS [81,86 ± 8,46%]. Tabla 1.- Primers utilizados en el genotipado de los SNPs Secuencia Gγ-XmnI (rs7482144) D: 5’ AAC TGT TGC TTT ATA GGA TTT T 3’ R: 5’ AGG AGC TTA TTG ATA ACC TCA GAC 3’ BCL11A (rs4671393) D: 5’ ATG GGA AGA GAC CCC AAA AC 3’ R: 5’ CCT TCT GCT TCC TGT TCA CC 3’ HBS1L-MYB (rs9376092) D: 5’ GAT CAC CCA TCC ATT CAT CC 3’ R: 5’ TCA CCT TCT GAT GTG AAG GAC T 3’ Donde D= Primer directo (5’→ 3’) y R= Primer reverso (3’→5’). Tabla 2.- Datos hematológicos Media ± DE Valores de referencia RBC (x 10 6 /mL) 3,11 ± 0,72 H: 4,52 – 5,90 M: 4,10 – 5,10 Hb (g/dL) 8,78 ± 1,27 H: 13,5 - 17,0 M: 11,6-15,0 HEMATOCRITO (%) 25,87 ± 4,11 H: 38,3 – 48,6 M : 36 – 45 VCM (fL) 86,36 ± 12,06 80 – 100,1 HCM (pg) 29,24 ± 4,72 27 – 32 CHCM (g/dL) 33,93 ± 1,40 33,4 – 35,5 ADE (%) 22,40 ± 4,06 <15,00 RETICULOCITOS (%) 9,13 ± 3,60 0,5-2,5 Los parámetros número de eritrocitos (RBC), hemoglobina (Hb) y hematocrito (Hto) [25,87 ± 4,11%] se encuentran dis- minuidos respecto a la normalidad. El ancho de distribución eritrocitario (ADE) y el recuento de reticulocitos estuvieron aumentados. El resto de magnitudes volumen corpuscular me- dio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concen- tración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) mostra- ron valores dentro del rango de referencia.