Anales de la RANM

24 A N A L E S R A N M R E V I S T A F U N D A D A E N 1 8 7 9 DIAGNÓSTICO PRENATAL NO INVASIVO DE LA ANEMIA FALCIFORME Ferrer Benito S, et al. An RANM. 2024;141(01): 21 - 29 z-score = (x - μ) / σ donde: χ = RMD obtenido μ = media de la población de referencia σ = desviación estándar de la población de referencia Se determinaron puntos de corte para clasificar con un 99% de confianza los genotipos fetales. Los valores de z-score inferiores a -2,6 se asociaron con mujeres embarazadas con feto homocigoto wildtype, mientras que aquellos superiores a +2,6 indicaron mujeres embarazadas con feto homoci- goto mutado. Los valores entre -1,5 y +1,5 se asignaron a mujeres embarazadas con feto hetero- cigoto. Además, se mantuvo una zona intermedia donde el resultado se consideró no concluyente. Una vez obtenido el diagnóstico en las gestantes, se verificó el resultado. Para ello se realizó el diagnós- tico de los recién nacidos, mediante el cribado neonatal de las hemoglobinopatías por la prueba del talón, que se lleva a cabo de forma universal en todo el territorio nacional. En el análisis estadístico descriptivo de los datos, las variables cualitativas se presentan con su distri- bución de frecuencia. Las variables cuantitativas se resumen con su media y desviación estándar (DE). Las variables cuantitativas que muestran una distri- bución asimétrica se resumen con la mediana y el rango intercuartílico (RIC). Se utilizó el z-score para clasificar los pacientes en el grupo de embara- zadas portadoras de HbS. El procesamiento de los datos se llevó a cabo mediante el software estadístico IBM SPSS Statis- tics v.26 y Microsoft Excel. El estudio se realizó con el consentimiento informado de todas las participantes y cuenta con la aprobación del CEIm Hospital Clínico San Carlos de Madrid. RESULTADOS Análisis de RMD utilizando PCR digital Se implementó la técnica de dPCR para determinar la RMD de alelos mutados en diferentes grupos de estudio. Los valores de RMD obtenidos demostraron una clara diferenciación entre las mujeres no embarazadas con distintos genotipos para la mutación HBB: c.20A>T. Aquellas que presentaban un genotipo homocigoto para la mutación, los valores de RMD se aproximaron a 1, con una media de 0.96, mientras que en las que el genotipo era wildtype , los valores de RMD estuvieron cercanos a 0, con una media de 0,02. Por último, en las heterocigotas se mantuvo el equili- brio alélico, y se observaron valores de RMD que oscilaron entre 0,442 y 0,493, con una media de 0,478 (Figura 1) (Tabla2). En el grupo de mujeres embarazadas, todas ellas portadoras de ECF, se detectaron resultados distin- tivos en función del genotipo fetal. Los resultados obtenidos mostraron variaciones en los valores de RMD que permitieron diferenciar eficazmente entre feto heterocigoto y feto wildtype . Específica- mente, en mujeres con feto heterocigoto, los valores de RMD se mantuvieron entre 0,436 y 0,501, con una media de 0,475. Por otro lado, en mujeres con feto homocigoto wildtype , los valores de RMD fluctuaron entre 0,377 y 0,431, con una media de 0,397 (Figura 1) (Tabla 3). Determinación del genotipo fetal mediante z-score Los resultados obtenidos de la caracterización genética revelaron una distribución interesante en relación con los valores obtenidos. Se identificaron 5 resultados que se ubicaron en una zona verde, con valores comprendidos entre -5,93 y -2,66 en la escala de referencia utilizada. Estos resultados indican un Tabla 1. Secuencia de primers y sondas utilizadas en la PCR digital. Primer directo CCCCACAGGGCAGTAACG Primer reverso AGCAACCTCAAACAGACACCAT Assay VIC CTGACTCCTG A GGAGAA Assay FAM CTGACTCCTG T GGAGAA En rojo se muestra el nucleótido que distingue la secuencia wildtype y la secuencia mutada, siendo la sonda unida al fluoróforo VIC la que detecta el alelo wildtype, y la sonda unida al fluoróforo FAM la que detecta la mutación de la hemoglobina S.